常规敲除与条件性敲除
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常规敲除(Traditional KO或Conventional KO)是通过同源重组技术,将基因组上的目的片段替换成一个Antibiotic Selection Marker,如PGK-Neomycin等。由于使用的neomycin标记两侧有loxp位点,即loxp-PGK-neomycin-loxp 结构,可以在中靶ES克隆中 表达Cre重组酶去除PGK-neomycin标记,当然,也可以选择在得到小鼠后,与全身表达Cre的小鼠交配的方式来去除这个标记。

条件型敲除(Conditional KO)策略是通过同源重组技术,在目的片段的两侧各引入一个loxp位点,其中,1st loxp是独立的loxp位点,2nd loxp位点旁边带有Neomycin标记,这里使用的PGK-neomycin两侧添加了FRT位点,即FRT-PGK-neomycin-FRT- loxp,可以在中靶ES克隆中表达Flpe重组酶去除PGK-neomycin标记,也可以在小鼠中完成,当然,也可以直接与组织特异性表达cre的品 系交配,去除目的片段和筛选标记。