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品系编号 T004285
品系名称 B6/JGpt-Rosa26em1Cin(CAG-cas9-tdTomato)/Gpt
曾用名
品系简称 B6-Cas9-tdTomato
品系来源
健康报告 -
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相关基因 Rosa26
品系类型 Knock in转基因
背景 [N000013] C57BL/6JGpt
对照鼠
提供基因型 (CAG-LSL-cas9,-tdTomato)KI/KI;(CAG-LSL-cas9,-tdTomato)wt/wt;(CAG-LSL-cas9,-tdTomato)KI/wt
毛色
引入代数
当前代数
繁育方式
保存方式 活体冷冻
平均单胎产仔量 0
建议繁殖笼淘汰周期
母性
品系描述

遗传修饰小鼠(敲除、敲入、突变、异源基因表达等)已经成为基因功能研究和疾病研究的重要模型,常用的方法是针对每个特定修饰制作一个小鼠品系,然后使用这个品系作为材料进行各种研究。随着ZFN,TALEN和CRISPR/Cas9等新技术的出现,基因编辑的技术难度降低,制作基因修饰小鼠模型的成本下降、时间缩短,特别是CRISPR/Cas9系统的出现,让一次同时修饰多个位点变得容易[1-3]。然而,CRISPR/Cas9系统的体内应用,特别是组织、细胞特异的区域性基因修饰仍然困难,在特异性表达Cas9时,很难找到满足需要的启动子,表达区域及表达时机难以控制。在活体小鼠的组织或细胞进行CRISPR/Cas9表达系统的转染时,常用的AAV(腺相关病毒)及LV(慢病毒)等转染效率高的病毒载体装载能力有限[4-6],难以同时表达sgRNA和Cas9蛋白。高压流体尾静脉注射可以克服载体大小限制,但仅对肝脏等少数器官有效,而且通常转染效率低下[7-10]。集萃药康在T002249-B6-CAG-loxP-STOP-loxP-Cas9-tdTomato小鼠模型的基础之上,与全身表达Cre重组酶的品系交配,去除STOP元件,开启Cas9和红色荧光的表达;通过回交,去除Cre的表达,建立了新的品系B6-CAG-Cas9-tdTomato。经检测,小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、胰腺、胃、膀胱、肠组织表达红色荧光,胰腺、肠、脾高表达cas9蛋白,心和肌肉组织几乎检测不到cas9蛋白表达。使用此小鼠进行活体小鼠组织或细胞编辑时,不再需要使用同时表达特异性启动子、sgRNA和Cre重组酶的AAV及LV进行感染,只需要提供表达sgRNA的载体即可在活体上实现基因编辑,不仅省去了寻找特异性启动子的麻烦,也大大节省了病毒的装载空间,可以提高病毒转染效率和基因编辑效率。

研究领域 工具鼠荧光蛋白标记小鼠
应用 肺癌模型 CRISPR/Cas9基因编辑 在活体上研究单个或多个基因敲除/敲入 条件型基因编辑 癌症相关研究
参考文献

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[2]Jinek,M.,Chylinski,K.,Fonfara,I.,Hauer,M.,Doudna,J.A.,andCharpentier,E.(2012).A programmable
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[3]Mali,P.,Yang,L.,Esvelt,K.M.,Aach,J.,Guell,M.,DiCarlo,J.E.,Norville,J.E.,andChurch,G.M.(2013).RNA-guided human genome engineering via Cas9.Science339,823-826.
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[10]Wells,D.J.(1993).Improved gene transfer by direct plasmid injection associated with regeneration in mouse skeletal muscle.FEBSletters332,179-182.

备注 -